T I: Biotecnologias Reprodutivas

Inseminação Artificial

• Mais usada em bovinos de leite. Usada em bovinos de carne que não ficam prenhes à cobrição e associada a sincronização de cios.
• Não melhora eficiência reprodutiva (excepto se doenças venéreas porque há menor mortalidade embrionaria).

Objectivos

• Modificação rápida da genética da manada - maior aproveitamento do sémen, selecção de características do macho.
• Produção de reprodutores.
• Controlo de doenças venéreas (campilobacter, tricomonas).

Factores de Sucesso

• Efectivo: fertilidade, estado sanitário, nutrição.
• Maneio: detecção de cios, registos.
• Capacidade fertilizante do sémen.
• Manutenção e preservação de sémen.
• Técnica de inseminação (cranial ao cervix).

Pontos a Ponderar

• Nutrição e Sanidade
• Equipamento e infraestruturas (tronco para bovinos de carne)
• Sincronização vs cio natural.
• Raça das fêmeas, maneio, nº do efectivo a inseminar.
• Relação técnico - efectivo - maneio.
• Programas permanentes vs esporadicos.

Sincronização de cios e da ovulação

• IA ou monta num curto período de tempo.
• Encurta época de partos: vitelos mais pesados e uniformes, novilhas com menos idade à cobrição.
• IA a tempo fixo (bovinos de leite).
• Objectivo: 100% das fêmeas em cio no mesmo dia e a ovularem a menos de 6 horas de diferença.

Hormomas

• GnRH (fertagil, receptal).
• Progesterona P4 (CIDR, PRID).
• Progestagénios sintéticos, estradiol (MGA).
• PGF2a (Dinolytic, Enzaprost-E, Estrumate).

PGF 2a

• Provoca luteolise do corpo luteo.
• A resposta depende do estádio de crescimento folicular e luteolise (só 30% fica gestante). O diesto tem 2 a 3 ondas foliculares, com fases de crescimento, estática e regressão. Se há foliculo dominante e ocorre luteolise, este ovula. Se o foliculo está dominante estatico ou em atresia, um novo foliculo tem que ser recrutado para ovular, levando mais tempo.
• Administrações entre o dia 7 e 8 apanha o foliculo da primeira onda, ocorrendo ocupação em 2 a 3 dias. Administrações aos 10 dias vão depender da onda, se o foliculo estiver em atresia vai esperar por novo foliculo dominante.
• Podem não responder. Pode fazer-se dupla injecção se não responder.

Dia 0 (1º PGF2a)	Resposta	Dia 11 (2º PGF2a)	Resposta
0-6d	7/21 não responde	11-17d	Respondem todas ou ovulam, cio natural
7d	Pode ou não responder	8 ou 18d	"
8-16d	9/21 responde (cio após 2 a 5d)	>8d	"

Ovosync

GnRH dia 0

• Induz ovulação de folículos dominantes. 
• Recruta crescimento de novos folículos. 
• Luteiniza folículos dominantes estáticos ou em regressão. 

PGF 2α dia 7

• Como todos os folículos foram luteinizados ou ovulados e as ondas foliculares sincronizadas, todas as vacas devem responder. 
• Em novilhas dar mias cedo. 

GnRH dia 9

• Induz a ovulação de todas as vacas. Inseminar 16 h mais tarde.

GnRH + PGF 2α

• 5% a 15% das vacas em cio antes da aplicação da prostaglandina. 
• Falha de resposta ovulatória à 1º GnRH (1-4d). 
• Vacas com luteólise espontânea entre 1º GnRH e PGF2alfa (>10d). 
• E em novilhas: taxa concepção 70% control vs 35% ovosync. 

Progesterona P4

• Quando se retira o efeito prolongado da P4 ou derivados, dá-se o início a uma cascata de eventos fisiológicos semelhantes ao final do diestro, estimulando produção de PGF2α, luteólise e cio. 
• Aumento de receptores de E2 no hipotálamo. 
• Cio em vacas ovariectomizadas.
• Impede manifestação de cio em novilhas entre administração de GnRH e PGF 2a - aumenta taxa de fertilidade em novilhas. 
• Formas de administração: intravaginal, PRID alpha Quick fit: 1.55 g Progesterona (CEVA), CIDR. 

Recolha, Preservação e Transferencia de Embriões (TE)

Objectivos

• Propagação de material genético de fêmeas de elevado potencial. 
• Bancos genéticos com o genoma de ambos progenitores. 
• Animais geneticamente modificados. 
• Preservação/multiplicação de embriões do sexo desejado (sexagem). 
• Descontaminação de embriões (ou então neosporose). 

Procedimentos

• Superovulação da dadora: FSH, eCG. 
• Sincronização das receptoras (8-10 / dadora): ± 24 horas da dadora. 
• Colheita de embriões (lavagem uterina): transcervical. 
• Avaliação dos embriões: estadio de desenvolvimento e qualidade. 
• Transferência (ipsilateral ao CL): transcervical - embriões frescos ou congelados. 

Estimulação ovárica para produção de embriões

• Inseminar 2 vezes com 12 horas de intervalo porque há mais que um occito. 
• 7 dias depois da 1ª inseminação já há morula e blastocistos que são retirados. 
• A resposta das dadoras (superocupadas) é mais rápida à PGF 1a, por isso faz-se mais tarde.

eCG (dadora)	FSH (dadora)	PRID (dadora)
1º dia: eCG na dadora. 2º dia: PGF 2a nas receptoras. 3º dia: 2x PGF 2a na dadora.	1º dia: FSH na dadora. 2º dia. FSH na dadora e PGF 2a na receptora. 3º dia: PGF 2a na dadora. 4º dia: FSH na dadora.	0 h: PRID intravaginal. 2 h: GnRH. 4 h - 7h: FSH. 7h-8h: FSH + PGF 2a (+ retirar PRID). 9h: AI. 16h: recolha de embrião. 17h: PGF 2a.

Limitações

• Os custos da TE são muito superiores aos da IA. 
• Trabalho especializado. 
• Resultados incertos (Média 6 embriões – 0 a 30). 
• O ganho genético adicional da TE nem sempre implica ganho económico (na produção de leite apenas 20% é de origem genética).

Recolha de Oócitos e Produção In Vitro de Embriões

1. Aspiração de oócitos. 
2. Selecção e maturação. 
3. Preparação de sémen. 
4. Fertilização. 
5. Cultura de embriões. 
6. Embriões. 

Utilizações

• Utilização do material genético de fêmeas abatidas. 
• Reprodução de vacas subférteis ou estéreis (associado à OPU). 
• Reprodução de vacas gestantes (associada à OPU). 
• Aumentar a fertilidade de vacas repetidoras.

Aspiração Ecoguiada de Oócitos (OPU)

• A técnica de OPU associada à fertilização in vitro tem o potencial de poder produzir números elevados de embriões.

Clonagem

• Utilização de células de um indivíduo e oócitos de um outro. 
• Potencial utilização para conservação de animais em riscos de extinção. 
• Pode não requerer manipulação reprodutiva do animal doador do material genético.

Clonagem por Transferência de Blastómeros 

• Biópsias de blastómeros. 
• Enucleação de oócito. 
• Reconstrução e fusão dos blastómeros no oócito enucleado. 

Clonagem por Transferência Nuclear 

• Cultura de células somáticas (fibroblasto). 
• Privação nutricional das células (G0). 
• Enucleação do oócito. 
• Reconstrução e fusão da célula somática com o oócito enucleado.

Vantagens

• Estudos genéticos e fisiológicos. 
• Multiplicação de espécies em extinção 

Desvantagens

• Custo/complexidade. 
• Taxa de insucesso (99%). 
• Desconhecimento de mecanismos de biologia celular

Animais Transgénicos

• Manipulação do genoma com vista à introdução de genes exteriores ao animal. 
• Realiza-se por: Injecção no pró-núcleo ou transferência de células estaminais. 
• Um gene de uma proteina é injectado em ovos fertilizado ou em células estaminais embrionárias. 10 a 20% dos animais vão apresentar uma copia do gene.
• Não se sabe o impacto na saúde humana, ainda é um assunto controverso. Não entram para consumo na UE.

Aplicações 

• Produção de vacinas 
• Vários campos : embriologia, genética e fisiologia. 
• Bases genéticas para estudos de doenças. 
• Testagem de terapias. 
• Proteínas para uso em Medicina Humana.